中國藥典2020版四部通則2001

顯微鑒別法

  顯微鑒別法系指用顯微鏡對藥材（飲片）切片、粉末、解離組織或表面制片及含飲片粉末的制劑中飲片的組織、細胞或內含物等特征進行鑒別的一種方法。鑒別時選擇具有代表性的供試品，根據各品種鑒別項的規定制片。制劑根據不同劑型適當處理后制片。

  一、 藥材（飲片）顯微制片

  1.橫切片或縱切片制片  取供試品欲觀察部位，經軟化處理后，用徒手或滑走切片法，切成10~20μm的薄片，必要時可包埋后切片。選取平整的薄片置載玻片上，根據觀察對象不同，滴加甘油醋酸試液、水合氯醛試液或其他試液1~2滴，蓋上蓋玻片。必要時滴加水合氯醛試液后，在酒精燈上加熱透化，并滴加甘油乙醇試液或稀甘油，蓋上蓋玻片。

  2.粉末制片  供試品粉末過四或五號篩，挑取少許置載玻片上，滴加甘油醋酸試液、水合氯醛試液或其他適宜的試液，蓋上蓋玻片。必要時，按上法加熱透化。

  3.表面制片  將供試品濕潤軟化后，剪取欲觀察部位約4mm2，一正一反置載玻片上，或撕取表皮，加適宜的試液或加熱透化后，蓋上蓋玻片。

  4.解離組織制片  將供試品切成長約5mm、直徑約2mm的段或厚約1mm的片，如供試品中薄壁組織占大部分，木化組織少或分散存在，采用氫氧化鉀法，若供試品質地堅硬，木化組織較多或集成較大群束，釆用硝鉻酸法或氯酸鉀法。

  （1）氫氧化鉀法  將供試品置試管中，加5%氫氧化鉀溶液適量，加熱至用玻璃棒擠壓能離散為止，傾去堿液，加水洗滌后，取少量置載玻片上，用解剖針撕開，滴加稀甘油，蓋上蓋玻片。

  （2）硝鉻酸法  將供試品置試管中，加硝鉻酸試液適量，放置至用玻璃棒擠壓能離散為止，傾去酸液，加水洗滌后，照上法裝片。

  （3）氯酸鉀法  將供試品置試管中，加硝酸溶液（1→2）及氯酸鉀少量，緩緩加熱，待產生的氣泡漸少時，再及時加入氯酸鉀少量，以維持氣泡穩定地發生，至用玻璃棒擠壓能離散為止，傾去酸液，加水洗滌后，照上法裝片。

  5.花粉粒與孢子制片  取花粉、花藥（或小的花）、孢子或孢子囊群（干燥的供試品浸于冰醋酸中軟化），用玻璃棒研碎，經紗布過濾至離心管中，離心，取沉淀加新配制的醋酐與硫酸（9：1）的混合液1~3ml，置水浴上加熱2~3分鐘，離心，取沉淀，用水洗滌2次，取沉淀少量置載玻片上，滴加水合氯醛試液，蓋上蓋玻片，或加50%甘油與1%苯酚各1~2滴，用品紅甘油膠［取明膠1g，加水6ml，浸泡至溶化，再加甘油7ml，加熱并輕輕攪拌至完全混勻，用紗布過濾至培養皿中，加堿性品紅溶液（堿性品紅0.1g，加無水乙醇600ml及樟油80ml，溶解）適量，混勻，凝固后即得］封藏。

  6.磨片制片  堅硬的動物、礦物類藥，可采用磨片法制片。選取厚度1~2mm的供試材料，置粗磨石（或磨砂玻璃板）上，加適量水，用食指、中指夾住或壓住材料，在磨石上往返磨礪，待兩面磨平，且厚度約數百微米時，將材料移置細磨石上，加水，用軟木塞壓在材料上，往返磨礪至透明，用水沖洗，再用乙醇處理和甘油乙醇試液裝片。

  二、含飲片粉末的制劑顯微制片

  按供試品不同劑型，散劑、膠囊劑（內容物為顆粒狀，應研細），可直接取適量粉末；片劑取2~3片，水丸、糊丸、水蜜丸、錠劑等（包衣者除去包衣），取數丸或1~2錠，分別置乳缽中研成粉末，取適量粉末；蜜丸應將藥丸切開，從切面由外至中央挑取適量樣品或用水脫蜜后，吸取沉淀物少量。根據觀察對象不同，分別按粉末制片法制片（1~5片）。

  三、細胞壁性質的鑒別

  1.木質化細胞壁   加間苯三酚試液1~2滴，稍放置，加鹽酸1滴，因木質化程度不同，顯紅色或紫紅色。

  2.木栓化或角質化細胞壁   加蘇丹Ⅲ試液，稍放置或微熱，顯橘紅色至紅色。

  3.纖維素細胞壁   加氯化鋅碘試液，或先加碘試液濕潤后，稍放置，再加硫酸溶液（33→50），顯藍色或紫色。

  4.硅質化細胞壁   加硫酸無變化。

  四、細胞內含物性質的鑒別

  1.淀粉粒

  （1）加碘試液，顯藍色或紫色。

  （2）用甘油醋酸試液裝片，置偏光顯微鏡下觀察，未糊化的淀粉粒顯偏光現象；已糊化的無偏光現象。

  2.糊粉粒

  （1）加碘試液，顯棕色或黃棕色。

  （2）加硝酸汞試液，顯磚紅色。材料中如含有多量脂肪油，應先用乙醚或石油醚脫脂后進行試驗。

  3.脂肪油、揮發油、樹脂

  （1）加蘇丹Ⅲ試液，顯橘紅色、紅色或紫紅色。

  （2）加90%乙醇，脂肪油和樹脂不溶解（蓖麻油及巴豆油例外），揮發油則溶解。

  4.菊糖   加10%α-萘酚乙醇溶液，再加硫酸，顯紫紅色并溶解。

  5.黏液  加釕紅試液，顯紅色。

  6.草酸鈣結晶

  （1）加稀醋酸不溶解，加稀鹽酸溶解而無氣泡發生。

  （2）加硫酸溶液（1→2）逐漸溶解，片刻后析出針狀硫酸鈣結晶。

  7.碳酸鈣結晶（鐘乳體）   加稀鹽酸溶解，同時有氣泡發生。

  8.硅質   加硫酸不溶解。

  五、顯微測量

  系指用目鏡測微尺，在顯微鏡下測量細胞及細胞內含物等的大小。

  1.目鏡測微尺   放在目鏡筒內的一種標尺，為一個直徑18~20mm的圓形玻璃片，中央刻有精確等距離的平行線刻度，常為50格或100格（圖1）。

  2.載物臺測微尺   在特制的載玻片中央粘貼一刻有精細尺度的圓形玻片。通常將長1mm（或2mm）精確等分成100（或200）小格，每1小格長為10μm，用以標定目鏡測微尺（圖2）。

  3.目鏡測微尺的標定   用以確定使用同一顯微鏡及特定倍數的物鏡、目鏡和鏡筒長度時，目鏡測微尺上每一格所代表的長度。

  取載物臺測微尺置顯微鏡載物臺上，在高倍物鏡（或低倍物鏡）下，將測微尺刻度移至視野中央。將目鏡測微尺（正面向上）放入目鏡鏡筒內，旋轉目鏡，并移動載物臺測微尺，使目鏡測微尺的“0"刻度線與載物臺測微尺的某刻度線相重合，然后再找第二條重合刻度線，根據兩條重合線間兩種測微尺的小格數，計算出目鏡測微尺每一小格在該物鏡條件下相當的長度（μm），如圖3所示，目鏡測微尺77個小格（0~77）與載物臺測微尺的30個小格（0.7~1.0）相當，已知載物臺測微尺每一小格的長度為10μm。目鏡測微尺每一小格長度為：10μm×30÷77=3.8μm。

  當測定時要用不同的放大倍數時，應分別標定。

  4.測量方法   將需測量的目的物顯微制片置顯微鏡載物臺上，用目鏡測微尺測量目的物的小格數，乘以上述每一小格的微米數。通常是在高倍鏡下測量，但欲測量較長的目的物，如纖維、導管、非腺毛等的長度時，需在低倍鏡下測量。記錄最大值與最小值（μm），允許有少量數值略高或略低于規定。