中國藥典2020版三部三部通則0861 

殘留溶劑測定法

　　藥品中的殘留溶劑系指在原料藥或輔料的生產中，以及在制劑制備過程中使用的，但在工藝過程中未能完全去除的有機溶劑。藥品中常見的殘留溶劑及限度見附表1，除另有規定外，第一、第二、第三類溶劑的殘留限度應符合附表1中的規定；對其他溶劑，應根據生產工藝的特點，制定相應的限度，使其符合產品規范、藥品生產質量管理規范（GMP）或其他基本的質量要求。

　　本法照氣相色譜法（通則0521）測定。

　　色譜柱

　　1.毛細管柱

　　除另有規定外，極性相近的同類色譜柱之間可以互換使用。

　�。�1）非極性色譜柱　固定液為100%的二甲基聚硅氧烷的毛細管柱。

　�。�2）極性色譜柱　固定液為聚乙二醇(PEG-20M)的毛細管柱。

　�。�3）中極性色譜柱　固定液為(35%)二苯基-(65%)甲基聚硅氧烷、(50%)二苯基-(50%)二甲基聚硅氧烷、(35%)二苯基-(65%)二甲基聚硅氧烷、(14%)氰丙基苯基-(86%)二甲基聚硅氧烷、(6%)氰丙基苯基-(94%)二甲基聚硅氧烷的毛細管柱等。

　�。�4）弱極性色譜柱　固定液為(5%)苯基-(95%)甲基聚硅氧烷、(5%)二苯基-(95%)二甲基硅氧烷共聚物的毛細管柱等。

　　2.填充柱

　　以直徑為0.18～0.25mm的二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球或其他適宜的填料作為固定相。

　　系統適用性試驗

　�。�1）用待測物的色譜峰計算，毛細管色譜柱的理論板數一般不低于5000；填充柱的理論板數一般不低于1000。

　�。�2）色譜圖中，待測物色譜峰與其相鄰色譜峰的分離度應大于1.5。

　�。�3）以內標法測定時，對照品溶液連續進樣5次，所得待測物與內標物峰面積之比的相對標準偏差（RSD）應不大于5%；若以外標法測定，所得待測物峰面積的RSD應不大于10%。

　　供試品溶液的制備

　　1.頂空進樣

　　除另有規定外，精密稱取供試品0.1～1g；通常以水為溶劑；對于非水溶性藥物，可釆用N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亞砜或其他適宜溶劑；根據供試品和待測溶劑的溶解度，選擇適宜的溶劑且應不干擾待測溶劑的測定。根據各品種項下殘留溶劑的限度規定配制供試品溶液，其濃度應滿足系統定量測定的需要。

　　2.溶液直接進樣

　　精密稱取供試品適量，用水或合適的有機溶劑使溶解；根據各品種項下殘留溶劑的限度規定配制供試品溶液，其濃度應滿足系統定量測定的需要。

　　對照品溶液的制備

　　精密稱取各品種項下規定檢查的有機溶劑適量，采用與制備供試品溶液相同的方法和溶劑制備對照品溶液；如用水作溶劑，一般應先將待測有機溶劑溶解在50%二甲基亞砜或N，N-二甲基甲酰胺溶液中，再用水逐步稀釋。若為限度檢查，根據殘留溶劑的限度規定確定對照品溶液的濃度；若為定量測定，為保證定量結果的準確性，應根據供試品中殘留溶劑的實際殘留量確定對照品溶液的濃度；通常對照品溶液色譜峰面積不宜超過供試品溶液中對應的殘留溶劑色譜峰面積的2倍，同時應根據實際情況調整，并確保濃度在方法學驗證的有效范圍內。必要時，應重新調整供試品溶液或對照品溶液的濃度。

　　測定法

　　第一法（毛細管柱頂空進樣等溫法）

　　色譜條件　柱溫一般為40～100℃；常以氮氣為載氣，流速為每分鐘1.0～2.0ml（一般適用于內徑為0.32mm或0.25mm類的色譜柱）；以水為溶劑時頂空瓶平衡溫度為70～85℃，頂空瓶平衡時間通常為30～60分鐘；進樣口溫度為200℃；如采用火焰離子化檢測器（FID），溫度為250℃。

　　測定法　取對照品溶液和供試品溶液，分別連續進樣不少于2次，測定待測峰的峰面積。

　　對色譜圖中未知有機溶劑的鑒別，可參考附表2進行初篩。

　　第二法（毛細管柱頂空進樣程序升溫法）

　　色譜條件　柱溫一般先在40℃維持8分鐘，再以每分鐘8℃的升溫速率升至120℃，維持10分鐘；以氮氣為載氣，流速為每分鐘2.0ml；以水為溶劑時頂空瓶平衡溫度為70～85℃，頂空瓶平衡時間通常為30～60分鐘；進樣口溫度為200℃；如采用FID檢測器，進樣口溫度為250℃。

　　具體到某個品種的殘留溶劑檢查時，可根據該品種項下殘留溶劑的組成調整升溫程序。

　　測定法　取對照品溶液和供試品溶液，分別連續進樣不少于2次，測定待測峰的峰面積。

　　對色譜圖中未知有機溶劑的鑒別，可參考附表3進行初篩。

　　第三法（溶液直接進樣法）

　　可采用填充柱，亦可采用適宜極性的毛細管柱。

　　測定法　取對照品溶液和供試品溶液，分別連續進樣2～3次，測定待測峰的峰面積。

　　計算法�。�1）限度檢查除另有規定外，按各品種項下規定的供試品溶液濃度測定。以內標法測定時，供試品溶液所得被測溶劑峰面積與內標峰面積之比不得大于對照品溶液的相應比值。以外標法測定時，供試品溶液所得被測溶劑峰面積不得大于對照品溶液的相應峰面積。

　�。�2）定量測定按內標法或外標法計算各殘留溶劑的量。

　　【附注】（1）當需要檢查有機溶劑的數量不多，且極性差異較小時，可采用等溫法。當需要檢查的有機溶劑數量較多，且極性差異較大時，可釆用程序升溫法。

　�。�2）除另有規定外，頂空條件的選擇：

　�、賾�根據供試品中殘留溶劑的沸點選擇頂空平衡溫度。對沸點較高的殘留溶劑，通常選擇較高的平衡溫度；但此時應兼顧供試品的熱分解特性，盡量避免供試品產生的揮發性熱分解產物對測定的干擾。

　�、陧斂掌胶鈺r間一般為30～45分鐘，以保證供試品溶液的氣-液兩相有足夠的時間達到平衡。頂空平衡時間通常不宜過長，如超過60分鐘，可能引起頂空瓶的氣密性變差，導致定量準確性的降低。

　�、蹖φ掌啡芤号c供試品溶液必須使用相同的頂空條件。

　�。�3）定量方法的驗證　當采用頂空進樣時，供試品與對照品處于不完全相同的基質中，故應考慮氣液平衡過程中的基質效應（供試品溶液與對照品溶液組成差異對頂空氣-液平衡的影響）。由于標準加入法可以消除供試品溶液基質與對照品溶液基質不同所致的基質效應的影響，故通常采用標準加入法驗證定量方法的準確性；當標準加入法與其他定量方法的結果不一致時，應以標準加入法的結果為準。

　�。�4）干擾峰的排除　供試品中的未知雜質或其揮發性熱降解物易對殘留溶劑的測定產生干擾。干擾作用包括在測定的色譜系統中未知雜質或其揮發性熱降解物與待測物的保留值相同（共出峰）；或熱降解產物與待測物的結構相同（如甲氧基熱裂解產生甲醇）。當測定的殘留溶劑超出限度，但未能確定供試品中是否有未知雜質或其揮發性熱降解物對測定有干擾作用時，應通過試驗排除干擾作用的存在。對第一類干擾作用，通常采用在另一種極性不同的色譜柱系統中對相同供試品再進行測定，比較不同色譜系統中測定結果的方法。如兩者結果一致，則可以排除測定中有共出峰的干擾；如兩者結果不一致，則表明測定中有共出峰的干擾。對第二類干擾作用，通常要通過測定已知不含該溶劑的對照樣品來加以判斷。

　�。�5）含氮堿性化合物的測定　普通氣相色譜儀中的不銹鋼管路、進樣器的襯管等對有機胺等含氮堿性化合物具有較強的吸附作用，致使其檢出靈敏度降低，應采用惰性的硅鋼材料或鎳鋼材料管路；采用溶液直接進樣法測定時，供試品溶液應不呈酸性，以免待測物與酸反應后不易汽化。

　　通常采用弱極性的色譜柱或其填料預先經堿處理過的色譜柱分析含氮堿性化合物，如果釆用胺分析專用柱進行分析，效果更好。

　　對不宜采用氣相色譜法測定的含氮堿性化合物，可采用其他方法如離子色譜法等測定。

　�。�6）檢測器的選擇　對含鹵素元素的殘留溶劑如三氯甲烷等，采用電子捕獲檢測器（ECD），易得到高的靈敏度。

　�。�7）由于不同的實驗室在測定同一供試品時可能采用了不同的實驗方法，當測定結果處于合格與不合格邊緣時，以采用內標法或標準加入法為準。

　�。�8）頂空平衡溫度一般應低于溶解供試品所用溶劑的沸點10℃以下，能滿足檢測靈敏度即可；對于沸點過高的溶劑，如甲酰胺、2-甲氧基乙醇、2-乙氧基乙醇、乙二醇、N-甲基吡咯烷酮等，用頂空進樣測定的靈敏度不如直接進樣，一般不宜用頂空進樣方式測定。

　�。�9）利用保留值定性是氣相色譜中最常用的定性方法。色譜系統中載氣的流速、載氣的溫度和柱溫等的變化都會使保留值改變，從而影響定性結果。校正相對保留時間（RART）只受柱溫和固定相性質的影響，以此作為定性分析參數較可靠。應用中通常選用甲烷測定色譜系統的死體積（t0）：

　　式中　tR為組分的保留時間；

　　　　　t'R為參比物的保留時間。

　�。�10）不同的溶劑在不同的色譜系統中RART值不同，附表2和附表3分別給出了諸殘留溶劑在三種極性不同的色譜系統（非極性色譜系統、中等極性色譜系統和極性色譜系統）中的RART值。