中國藥典2020版四部通則1214

洋地黃生物測定法

　　本法系比較洋地黃標準品（S）與供試品（T）對鴿的最小致死量（U/kg），以測定供試品的效價。

　　標準品溶液的制備    迅速精密稱取洋地黃標準品適量，避免吸潮，置玻璃容器內，按標示效價計算，每1單位精密加入76%乙醇1ml，密塞，連續振搖1小時，靜置片刻，用干燥濾器迅速濾過，防止乙醇揮發，濾液即為每1ml中含1單位的溶液，4～8℃貯存，經驗證保持活性符合要求的條件下，可在1個月內使用。

　　標準品稀釋液的制備    試驗當日，精密量取標準品溶液適量，用0.9%氯化鈉溶液稀釋，稀釋液濃度（U/ml）應調節適當（一般可用1→30），使鴿的平均最小致死量為25～34ml。

　　供試品溶液和稀釋液的制備    供試品如為粉末，精密稱取適量，按標示量或估計效價（AT），照標準品溶液及其稀釋液的制備法制備；供試品如為片劑，取20片以上，精密稱重，求出平均片重，迅速研細，再精密稱取不少于20片的粉末，按稱重及標示量（AT）計算，照標準品溶液及其稀釋液制備法制備。供試品稀釋液和標準品稀釋液的鴿平均最小致死量（ml）應相近。

　　測定法    取健康合格的鴿，試驗前16～24小時禁食，但仍給予飲水，試驗前準確稱重，選取體重在250～400g的鴿（每次試驗所用鴿的體重相差不得超過100g），按體重隨機等分成兩組,每組至少6只，一組為標準品組，一組為供試品組，兩組間鴿的情況應盡可能相近。

　　將鴿仰縛于適宜的固定板上,在一側翼靜脈處拔除羽毛少許，露出翼靜脈，插入與滴定管（精密度0.02ml）相連的注射針頭，緩緩注入標準品稀釋液或供試品稀釋液，開始時，一次注入0.5ml，然后以每分鐘0.2ml等速連續注入，至鴿中毒死亡立即停止注入。一般死亡前有強烈顫抖、惡心嘔吐、排便等現象發生，至瞳孔迅速放大、呼吸停止為終點。記錄注入稀釋液的總量（ml），換算成每1kg體重致死量（ml）中所含效價（U/kg），取其10倍量的對數值作為反應值，照生物檢定統計法（通則1431）中的直接測定法計算效價及實驗誤差。

　　本法的可信限率（FL%）不得大于15%。