中國藥典2020版四部通則1219

生長激素生物測定法

       1.去垂體大鼠體重法

　　本法系通過比較生長激素標準品（S）與供試品（T）對幼齡去垂體大鼠體重增加的程度，以測定供試品效價的一種方法。
　　標準品溶液的制備    試驗當日，取標準品，按標示效價用含0.1%牛血清白蛋白的0.9%氯化鈉溶液，制成高、低兩種濃度的標準品溶液。一般高濃度標準品溶液配成每1ml含0.1～0.2IU，低濃度標準品溶液配成每1ml含0.025～0.05IU，高低兩濃度比值（r）一般為1∶0.25，標準品溶液分裝成每天劑量并密封于-15℃以下保存，臨用時融化。
　　供試品溶液的制備    按供試品的標示效價或估計效價（AT），照標準品溶液的制備及保存方法制備和保存。
　　測定法     取同一來源、品系，出生26～28天，體重60～80g，同一性別，健康的大鼠，試驗前2～3周手術摘除垂體，手術后于屏障環境飼養使其恢復。
　　取去垂體手術后2～3周、體重變化小于手術前±10%的大鼠，按體重隨機等分成4組，每組至少8只，每只編號并記錄體重。分別自頸部皮下注射一種濃度的標準品溶液或供試品溶液0.5ml，每日1次，連續6日。于最后1次給藥后24小時，處死大鼠，稱體重，必要時實驗結束后可進行尸檢，切開蝶鞍區，肉眼檢查有無垂體殘留，剔除有垂體殘存的大鼠。每只動物給藥后體重增加的克數作為反應值。供試品與標準品各劑量組所致反應的平均值應相當。照生物檢定統計法（通則1431）中的量反應平行線測定法計算效價及實驗誤差。
　　本法的可信限率（FL%）不得大于50%。
　　2.去垂體大鼠脛骨法
　　本法系通過比較生長激素標準品（S）與供試品（T）對去垂體大鼠脛骨骨骺板寬度增加的程度，以測定供試品效價的一種方法。
　　標準品溶液和供試品溶液的制備    同體重法。
　　測定法    本法可與去垂體大鼠體重法同步進行。待體重法實驗結束后，取下兩腿脛骨，置10%甲醛溶液保存，從脛骨近心端頂部中間沿矢狀面切開，置10%甲醛溶液中保存，水洗10分鐘后，置丙酮溶液中10分鐘，水洗3分鐘，置2%硝酸銀溶液中染色2分鐘，水洗后置水中強光照射至變棕黑色，于10%硫代硫酸鈉溶液固定30秒，置80%乙醇溶液中供測量用。測量時沿刨面切1mm左右薄片，置顯微鏡下測量脛骨骨骺板寬度，作為反應值。照生物檢定統計法（通則1431）中的量反應平行線測定法計算效價及實驗誤差。
　　本法的可信限率（FL%）不得大于50%。